国立感染症研究所

<チクングニアウイルス遺伝子検出法>

TaqMan用プローブ、プライマー
Probe: Taq-Chik638P:FAM-TACCAGCCTGCACYC-MGB-3’
Primer(F)Taq-Chik607F10849GCR CCM TCT KTA ACG GAC AT
Primer(R)Taq-Chik672R10894):GCC CCC RAA GTC KGA GGA R
現在流行中のレユニオン株に対して、本法の検出限界は0.2pfu/tubeです。
反応液組成と反応条件は、ウエストナイルウイルスの場合と同様です。WNV検査マニュアルを参照してください。

<通常PCR用>
Chik10294sACG CAA TTG AGC GAA GCA CAT
Chik10573cAAA TTG TCC TGG TCT TCC TG
AccessQuick RT-PCR Master Mixを使用しています。以下がその条件です。
Master MIX
H2O17.0ul
AccessQuick Master Mix 2x25.0ul
Rrimer F(10pmol/ul)1.0ul
Primer R(10pmol/ul)1.0ul
RTase: 1.0ul(5U)
Sample RNA                      5.0ul  
Total                               50.0ul

45 x 45min
92 x 2min
      
[1]92 x 1 min
[2]53 x 1 min    [1]→[2]→[3]を35-40 cycle
[3]72 x 1 min
      
72 x 10 min
      
 4                                   



                                               (国立感染症研究所 ウイルス第一部 2011年11月14日)

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