チクングニアウイルス遺伝子検出法（ウイルス第一部）

＜チクングニアウイルス遺伝子検出法＞

TaqMan用プローブ、プライマー
◎Probe: Taq-Chik638P：FAM-TACCAGCCTGCACYC-MGB-3’
○Primer(F)：Taq-Chik607F（10849）：GCR CCM TCT KTA ACG GAC AT
○Primer(R)：Taq-Chik672R（10894）：GCC CCC RAA GTC KGA GGA R
現在流行中のレユニオン株に対して、本法の検出限界は0.2pfu/tubeです。
反応液組成と反応条件は、ウエストナイルウイルスの場合と同様です。WNV検査マニュアルを参照してください。

＜通常PCR用＞
Chik10294s：ACG CAA TTG AGC GAA GCA CAT
Chik10573c：AAA TTG TCC TGG TCT TCC TG
AccessQuick RT-PCR Master Mixを使用しています。以下がその条件です。
Master MIX
H₂O：17.0ul
AccessQuick Master Mix 2x：25.0ul
Rrimer F(10pmol/ul)：1.0ul
Primer R(10pmol/ul)：1.0ul
RTase： 1.0ul(5U)
Sample RNA                     　5.0ul
Total                               50.0ul

45℃ x 45min
92℃ x 2min
      ↓
[1]92℃ x 1 min
[2]53℃ x 1 min　　　 [1]→[2]→[3]を35-40 cycle
[3]72℃ x 1 min
      ↓
72℃ x 10 min
      ↓
4℃

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　（国立感染症研究所　ウイルス第一部　201１年11月14日）