A型肝炎ウイルスによる家族内での集団感染事例―川崎市

2013年３～７月までの長期間にわたり、川崎市内の一家族内においてA型肝炎ウイルス（HAV）による集団感染が認められたので報告する。

同居家族は夫（39歳）、妻（45歳）、長男（５歳）の３名で、３月中旬に夫が発熱、嘔吐、黄疸を呈し医療機関を受診した。その際、HAV特異的IgM抗体の上昇が認められ、HAV感染症と診断された。同一時期に職場ならびに近親者での発症はみられず、原因となった食品は不明であった。夫の発症から２カ月後に、妻が発熱を訴え医療機関を受診した。その後、嘔吐、黄疸が出現し、１週間経過後も症状が改善しないため入院するに至った。本研究所にてPCR検査を実施したところ、発症から12日目に採取した妻の血清からHAV遺伝子が検出され、VP1/2A領域（498bp）のDNAシークエンス解析の結果、1A-1のクラスターに属することが確認された（図1）。また、長男は母親の入院期間中は保育園を休園していたが、その間も発症することなく無症候であった。しかし、母親の発症から１ヵ月後に採取した長男の糞便からもPCR検査でHAV遺伝子が検出され、ウイルスの排泄状況の確認ならびに保育園での集団生活に際する周囲への蔓延防止の観点から継続的な検査を行う必要があると判断した。２週間毎の再検査を行ったところ、２度目の検査でもHAVが検出され、継続してウイルスが排泄されていることが確認されたが、３度目の検査ではHAV陰性となり、本児が感染源となるリスクは回避された（図2）。

興味深いことに、男児から検出されたVP1/2A領域の遺伝子配列を解析したところ、初回の検査では母親から検出された遺伝子と100％一致していたものの、２度目の検査では、2A領域に6塩基の欠損が生じていた（図3）。

HAVは潜伏期間が長く、ウイルスの糞便への排泄期間も発症の前後２～３週間と長いため、家族など接触が密である集団内では発症リスクが高い傾向がある。また一般的に、成人では肝機能障害の症状が強く、劇症化することもあるが、小児では不顕性感染や軽症例であることが多いとされている。本事例でも男児の糞便検体から長期間のウイルス排泄が確認されたにもかかわらず、急性肝炎特有の症状は認められなかった。小児におけるHAV感染の報告は少なく、年齢による症状の重症化など、病態は依然として不明な点が多い。今回男児から検出された6塩基欠損の遺伝子についてその役割は不明であるが、少ない小児の貴重な感染事例として、より詳細な解析を行っていきたい。

無菌性髄膜炎患者からのエコーウイルス30型の検出状況（2013年）―滋賀県

2013年５～６月に無菌性髄膜炎患者（疑い含む）16名の検査をしたところ、12名からエコーウイルス30型（以下E30）が検出された。その12名由来の検体は、２カ所の病原体定点医療機関で採取されたものであった。E30が検出された患者の性別は男性６名、女性４名で、２名は不明であった。年齢分布は４歳が４名と最も多く、次いで５歳と６歳が各２名、８歳が１名であったが、残り３名は不明であった。記載のあった11名の主な症状は、発熱（11名）、頭痛（４名）、嘔吐（３名）および上気道炎（３名）であった。発熱は37.4℃～39.4℃で、平均は38.7℃であった。

エンテロウイルスの検査は、PCR法による遺伝子検出と培養細胞によるウイルス分離／同定を実施した。遺伝子検査には、EVP2/OL-68-1およびEVP4/OL-68-1のプライマーを用いてRT-semi nested PCR後、バンドが得られたものについてダイレクトシークエンスを行いGenBank中の登録株と系統解析を行った。クラスターを形成した株のうち代表株につきCODEHOP-snPCR法によるVP1シークエンス、および分離株すべてについて中和試験により血清型を決定した。なおウイルス分離には、RD-18S、Vero-E6およびHEp-2の各細胞を用いている。その他ウイルスの遺伝子検査についても、症状に応じて実施した。

E30が検出された症例一覧を表１に示す。E30は、遺伝子検査により12名由来の検体から検出され、材料別では髄液11件中11件および咽頭ぬぐい液３件中３件から検出された。

また、ウイルス分離は検体量不足のため２名については実施できなかったが、９名から分離株を得、材料別では髄液９件中８件および咽頭ぬぐい液３件中３件から分離された。

E30が検出された12名中３名では、髄液からアデノウイルス（以下AD）も同時に検出されている。

VP1領域275bpの系統解析の結果、滋賀分離株-20130140CはBastianii株（標準株）と約80％一致しており、2008～2010年に検出された国内分離株とは約７％異なっていた（図）。

2013年３～７月に採取された無菌性髄膜炎患者（疑い含む）からのウイルス検出状況を表２に示す。３月にコクサッキーウイルスB群3型（以下CB3）およびエコーウイルス18型（以下E18）が検出されている。

滋賀県感染症発生動向調査における無菌性髄膜炎の定点当たりの患者数は、2013年第16週に0.14人／定点を示し、第22週は0.28人／定点であった。

管轄保健所でこれら無菌性髄膜炎患者（疑い含む）の調査を行ったところ、疫学的な関連性は認められなかった。

E30は、滋賀県では1990～1991年、1997～1998年および2003年に多く分離されている。現在も検体搬入が続いており、前回の流行から感受性個体が蓄積しているため、今後のＥ30の動向について注視していきたい。

無菌性髄膜炎患者からのエンテロウイルスの検出―大分県

大分県において、2013年第４週～第32週までに採取された無菌性髄膜炎患者検体からのウイルス検出状況について報告する。

患者発生状況：患者定点からの報告は多くない。しかし、第24週（6/10～6/16）以降、検査定点より無菌性髄膜炎と診断されて当センターに搬入される検体が増加し、第31週（7/22～7/28）に入ってようやく減少してきた（図１）。

材料および方法：2013年１～８月に無菌性髄膜炎と診断され、当所に搬入された患者27名36検体（髄液23検体、咽頭ぬぐい液13検体）を検査材料とした。エンテロウイルスの遺伝子検査は、まず、スクリーニングとしてVP4/VP2領域を標的としたsemi-nested PCR法¹⁾を行った。エンテロウイルス陽性のものについては、VP1領域を標的としたnested PCR法²⁾およびダイレクトシークエンスで塩基配列を決定し、BLASTによる相同性検索で型別同定を行った。また、得られた塩基配列（355bp）を用いて近隣結合法による系統解析を行った。

ウイルス分離は、７細胞（HEp-2、RD-18S、Caco-2、MARC-145、Vero 9013、Vero E6、LLC-MK2）を使用し、１代を１週間として３代目まで継代および観察を行った。分離株は中和試験を行うとともに、VP1領域を標的としたnested PCR法を用いて同定した。

結果および考察：遺伝子検査を実施した36検体のうち、22検体からエンテロウイルスが検出された。型の内訳は、Echovirus30（Echo30）が13検体、Echovirus6（Echo6）が7検体、Coxsackievirus A9（CA9）が2検体であった。検出された患者の年齢分布をみると、５～９歳が最も多く17検体であった。エンテロウイルス以外ではCMVとHHV6が各１件ずつ検出された（表1）。

ウイルス分離については、Echo30が8株、Echo6が5株、ともにRD-18S およびCaco-2で分離できた。CA9はCaco-2で２株分離できた。

今回得られたEcho30およびEcho6と、これまで国内外で報告されている株の系統樹を作成したところ、今回分離されたEcho30株は、VP1部分配列においてBastianii（参照株）と約80％一致しているが、GenBankに登録されている2008～2010年国内分離株とは5％程度異なっていた(図２)。Echo6については2010～2012年に欧州で報告された株とほぼ同一クラスターを形成した（図３）。

Echo30については、無菌性髄膜炎の患者検体から最も多く検出されているが、咽頭炎や手足口病、ヘルパンギーナ、肺炎と診断された患者からも検出されている。またEcho6についても咽頭炎で検出されている。好発年齢が幼稚園や小学校に通う児童であることより、９月以降の動向に注意が必要と考える。