マルチプレックスPCRによるロタウイルスのVP7遺伝子型判定法

(IASR Vol. 40 p205-206:2019年12月号)

背　景

A群ロタウイルス（Rotavirus A:RVA）は乳幼児の感染性胃腸炎の主な原因ウイルスである。ワクチンは, 2011年11月（Rotarix^®）および2012年7月（RotaTeq^®）から任意接種ワクチンとして導入されているが, 2020年10月からは定期接種化される予定である。RVAのゲノムは2本鎖RNAから成る11本の遺伝子分節で構成されており, その中でも, ウイルス粒子の外殻タンパク質を構成するVP7の遺伝子型（G型）が, そのウイルスの抗原性を把握する上で重要である。前記事「ロタウイルスワクチン導入後の流行株の変化」でも述べた通り, RVAの主要な流行遺伝子型は, ワクチン導入以前はG1, G2, G3, G4, G9型の5種類とされていたが, ワクチン導入後は, 非典型的な遺伝子型構成を持つDS-1-like G1やDS-1-like G3（equine-like G3）, 以前はマイナーだったG8（bovine-like G8）など, 新規の流行株が続々と出現し, わが国においても広く流行が認められている^1-3）。海外では既に広く流行しているG12型が^4-6）, わが国に侵入して流行を引き起こす可能性も否定できない。このような状況から, RVAの検査体制の重要性はますます高まっている。VP7遺伝子型の判定法としては, マルチプレックスPCR法（semi-nested multiplex-PCR）が従来から行われている。この方法は, シークエンスを解析することなく遺伝子型を調べることができるため, 簡便かつ非常に有用な検査方法である。ただし, IASR 2017年8月号にて指摘した通り^7）, 従来まで使用されていたプライマーセット（Gouvea’s primer set）は, 近年の流行株では誤判定となる例が多数見受けられる。そこで, 我々は, 近年の流行株に対応した新しいプライマーセットを開発したので, ここに紹介する。